沖洗：  材料自固定液中取出后，需立即沖洗，使其中所有的固定液全部除去，以妨礙染色 有些固定液，如10%福爾馬林液、Bouin氏液固定的材料，若時(shí)間較短的話可不必沖洗。但時(shí)間過(guò)長(zhǎng)亦需沖洗  3、脫水（37度恒溫箱）  所謂脫水就是利用脫水劑將組織內(nèi)的水分置換出來(lái)，以利于有機(jī)溶劑的滲入，這一過(guò)程稱為脫水。  脫水是否徹底，直接關(guān)系到組織是否能充分透明   脫水過(guò)度（原因是組織在純酒精內(nèi)時(shí)間過(guò)久，發(fā)生組織質(zhì)地發(fā)生變化）容易造成組織發(fā)脆。造成組織發(fā)脆的原因還有加溫（溫度超過(guò)36℃）、脫水劑內(nèi)加有丙酮、浸蠟用的石蠟

中二甲苯過(guò)多等等。一般我們總認(rèn)為組織發(fā)脆跟高濃度酒精有關(guān)，而忽視了與低濃度的酒精關(guān)系，其實(shí)低濃度的酒精具有強(qiáng)大的穿透力，比純酒精更容易滲透到組織塊內(nèi)部使之脫水，組織如果在低濃度酒精里充分脫水，在高濃度酒精里只需脫去從低濃度到高濃度之間的水份，因此，僅需短時(shí)間就可完成，如果這時(shí)不縮短純酒精的時(shí)間，便會(huì)引起組織發(fā)脆；如果脫水時(shí)加溫，使用丙酮，還可引起組織收縮，并影響免疫組織化學(xué)的標(biāo)記.

①新鮮恒冷箱冷凍切片，厚6~8μm，平貼在蓋玻片上。

②滴染法：將有冷凍切片的蓋玻片（標(biāo)本面朝上）平放于預(yù)熱好的培養(yǎng)皿中（底部墊一濕濾紙），滴加孵育液至全部覆蓋組織，于37℃溫箱中孵育45~60分鐘（肝，心肌組織15分鐘即可）。

③于生理鹽水中沖洗二次（輕晃，以防脫片）。

④10%福爾馬林生理鹽水固定10分鐘。

⑤15%酒精浸洗5分鐘（換二次）。

⑥甘油明膠封片。

結(jié)果：酶活性強(qiáng)處呈藍(lán)色顆粒（雙甲沉淀），酶活性較低時(shí)形成紫紅色單甲。在光鏡下，該酶活性于肝小葉內(nèi)分布呈明顯分帶現(xiàn)象，周邊帶強(qiáng)于中央帶。在心肌細(xì)胞縱切面，酶活性顆粒沿心肌細(xì)胞長(zhǎng)軸整齊排列，相鄰心肌細(xì)胞的空白處為閏盤(pán)。

浸蠟：熔化后的液體石蠟作為組織塊的支撐物浸入組織塊，替換出組織內(nèi)的透明劑的過(guò)程為浸蠟。其目的是以石蠟置換出組織塊中的二甲苯，石蠟滲入組織內(nèi)部，使原來(lái)較軟的組織塊變成具有一定硬度的含蠟的組織塊，易于下一步的石蠟bao埋和切片。組織塊浸蠟一般要經(jīng)過(guò)要經(jīng)過(guò)2-3次石蠟浸漬才能完成。一般{dy}缸石蠟用低熔點(diǎn)的軟蠟（熔點(diǎn)54℃以下），第二缸、第三缸石蠟用高熔點(diǎn)的硬蠟（熔點(diǎn)60-62℃），組織塊依次浸漬，浸蠟的總時(shí)間一般在3h左右。若浸蠟時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，會(huì)造成組織脆硬，切片時(shí)易破碎，如豆渣樣。若浸蠟時(shí)間不足，則浸蠟不透，也難以制成高質(zhì)量的切片。