取材組織取材的方法是制作切片的一個重要程序,根據(jù)教學(xué)、科研及外檢的具體要求取自人體(外科手術(shù)切除標(biāo)本、活檢標(biāo)本、尸檢標(biāo)本)或動物,并確定取材的部位和方法。取材者需要掌握解剖學(xué)、組織學(xué)、病理學(xué)的基本理論知識,還要掌握實(shí)際操作技術(shù),每個組織器官的取材都有一定的部位和方法,不能任意切取組織作為制片材料,不然,無法達(dá)到教學(xué)、科研和臨床診斷的目的,具體要求如下:
(1)材料新鮮:取材組織愈新鮮愈好,人體組織一般在離體后,動物組織在處死后迅速固定,以保證原有的形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)。
染色和封片
常用的染色方法是蘇木素-伊紅(Hematoxylin-Eosin)染色法,簡稱H.E染色法。這種方法對任何固定液固定的組織和應(yīng)用各種bao埋法的切片均可使用。蘇木素是一種堿性染料,可使組織中的嗜堿性物質(zhì)染成藍(lán)色,如細(xì)胞核中的染色質(zhì)等;伊紅是一種酸性染料,可使組織中的嗜酸性物質(zhì)染成紅色,如多數(shù)細(xì)胞的胞質(zhì)、核仁等在H.E染色的切片中均呈紅色。
H.E染色程序如下:脫蠟、脫苯、復(fù)水、染色、脫水、透明、封固
常規(guī)蘇木素染色中的對比染色是用伊紅,近年來在英、美國家的一些實(shí)驗(yàn)室則采用焰紅(phloxine),此外也有用桔黃G(OrangeG)、比布里希猩紅(Biebrich scarlet)、波爾多紅(Bordeaux red)等作為對比染色。伊紅為染胞質(zhì)、膠原纖維、肌纖維、嗜酸性顆粒等常用的染料。
在切片放蠟塊時,應(yīng)注意組織bao埋的方向,組織的層次,纖維、肌肉等的走向應(yīng)與切片刀平行,較難切的部分應(yīng)放在上面,如皮膚的表皮,腫塊的bao膜,胃腸道的漿膜等,這樣可以減少組織的斷裂現(xiàn)象。操作切片機(jī)時應(yīng)用力均勻,避免用力過重。對脫鈣組織、骨髓,以及已知的鈣化組織,應(yīng)選用固定的刀口,以減少其他部位出現(xiàn)缺口的可能性。在使用毛筆展片時要防止筆絲進(jìn)入刀口,因?yàn)槊壳械揭桓P絲,就會增加一個缺口。切片厚度一般為4~6微米,有人認(rèn)為:只要切片機(jī)刻度標(biāo)著幾個微米,切出來的片子就是幾個微米。其實(shí)不然,當(dāng)切片刀不鋒利,或切片時速度不勻,或切的較慢時,切的片子都會變厚,只有在切片刀十分鋒利、切片勻速的情況下,才能真正保證其厚度。