一、實(shí)驗(yàn)原理
是采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被人胰島素受體α(INSRA)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人胰島素受體α(INSRA)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。
二、兔腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒樣本處理要求
1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5.組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能人上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
三、兔腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒產(chǎn)品優(yōu)勢
1. 品種齊全、質(zhì)量可靠、靈敏度高、操作簡便、穩(wěn)定性好。
2. 特異性強(qiáng)：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
3. 重復(fù)性好：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% 。
4. 同城（上海）需要代測可免費(fèi)上門取樣，享送貨上門服務(wù)。
5. 根據(jù)客戶需求定制elisa試劑盒并提供免費(fèi)代測服務(wù)。
6. 臻科生物可提供專業(yè)技術(shù)服務(wù),為您解決實(shí)驗(yàn)進(jìn)程中所遇到一切實(shí)驗(yàn)問題。
四、兔腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒組成
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試劑盒組成
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48孔配置
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96孔配置
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保存
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說明書
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1份
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1份
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封板膜
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2片（48）
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2片（96）
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密封袋
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1個
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1個
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酶標(biāo)包被板
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1×48
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1×96
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2-8℃保存
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標(biāo)準(zhǔn)品：36U/L
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0.5ml×1瓶
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0.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
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1.5ml×1瓶
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1.5ml×1瓶
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2-8℃保存
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酶標(biāo)試劑
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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樣品稀釋液
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3 ml×1瓶
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6 ml×1瓶
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2-8℃保存
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試劑盒組成
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48孔配置
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96孔配置
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保存
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說明書
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1份
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1份
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封板膜
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2片（48）
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2片（96）
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五、兔腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒注意事項
1. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
3. 板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。
4. 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。
5. 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。
6. 在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射。
7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8. 反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。
9. 不能使用過期產(chǎn)品。
10. 實(shí)驗(yàn)還需要酶標(biāo)儀（450nm），37℃恒溫箱，高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL以及蒸餾水或去離子水。
11. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。
12. 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
13. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
六、兔腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒操作步驟
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1. 對應(yīng)板孔中加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品工作液或樣本，37℃孵育90分鐘
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2. 棄掉板內(nèi)液體后，立即加入100μL生物素化抗體工作液，37℃孵育60分鐘
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3. 棄掉板內(nèi)液體，洗板3次
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4. 每孔加入100μL HRP酶結(jié)合物工作液，37℃孵育30分鐘，棄掉板內(nèi)液體，洗板5次
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5. 每孔加入90μL底物溶液，37℃孵育15分鐘左右
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6. 每孔加入50μL終止液
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7. 立即在450nm波長下讀數(shù)，處理數(shù)據(jù)
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七、兔腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)結(jié)果計算
以所測標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計算出樣品的濃度。
