1 范圍
本規(guī)范規(guī)定了動物皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗的基本原則、要求和方法。
本規(guī)范適用于化妝品原料及其產(chǎn)品安全性毒理學(xué)檢測。
2 規(guī)范性引用文件
OECD Guidelines for Testing of Chemicals（No 406，July 1992）
USEPA OPPTS Harmonized Test Guidelines（Series 870.2600，Aug.1998）
3 試驗?zāi)康?br /> 確定重復(fù)接觸化妝品及其原料對哺乳動物是否可引起變態(tài)反應(yīng)及其程度。
4 定義
4.1 皮膚變態(tài)反應(yīng)（過敏性接觸性皮炎）（Skin sensitization，allergic contact dermatitis）
是皮膚對一種物質(zhì)產(chǎn)生的免疫源性皮膚反應(yīng)。在人類這種反應(yīng)可能以瘙癢、紅斑、qz、
水皰、融合水皰為特征。動物的反應(yīng)不同，可能只見到皮膚紅斑和水腫。
4.2 誘導(dǎo)接觸（Induction exposure）
指機(jī)體通過接觸受試物而誘導(dǎo)出過敏狀態(tài)的試驗性暴露。
4.3 誘導(dǎo)階段（Induction period）
指機(jī)體通過接觸受試物而誘導(dǎo)出過敏狀態(tài)所需的時間，一般至少一周。
4.4 激發(fā)接觸（Challenge exposure）
機(jī)體接受誘導(dǎo)暴露后，再次接觸受試物的試驗性暴露，以確定皮膚是否會出現(xiàn)過敏反應(yīng)。
5 試驗的基本原則
實驗動物通過多次皮膚涂抹（誘導(dǎo)接觸）或皮內(nèi)注射受試物 10d~14d（誘導(dǎo)階段）后，
給予激發(fā)劑量的受試物，觀察實驗動物并與對照動物比較對激發(fā)接觸受試物的皮膚反應(yīng)強(qiáng)
度。
5.1 實驗動物和飼養(yǎng)環(huán)境
一般選用健康、成年雄性或雌性豚鼠，雌性動物應(yīng)選用未孕或未曾產(chǎn)仔的。
實驗動物及實驗動物房應(yīng)符合國家相應(yīng)規(guī)定。選用常規(guī)飼料，飲水不限制，需注意補(bǔ)充
適量Vc。
5.2 動物試驗前準(zhǔn)備
試驗前動物要在實驗動物房環(huán)境中至少適應(yīng)3d~5d 時間。將動物隨機(jī)分為受試物組和對
照組，按所選用的試驗方法，選擇適當(dāng)部位給動物備皮（去毛），避免損傷皮膚。試驗開始
和結(jié)束時應(yīng)記錄動物體重。
5.3 無論在誘導(dǎo)階段或激發(fā)階段均應(yīng)對動物進(jìn)行全面觀察包括全身反應(yīng)和局部反應(yīng)，并作
完整記錄。
5.4 試驗方法可靠性的檢查
使用已知的能引起輕度/中度致敏的陽性物每隔半年檢查一次。局部封閉涂皮法至少有
30%動物出現(xiàn)皮膚過敏反應(yīng)；皮內(nèi)注射法至少有60%動物出現(xiàn)皮膚過敏反應(yīng)。陽性物一般采
111
用2,4-二硝基氯代苯，肉桂醛，2-巰基苯并噻唑或?qū)Π被剿嵋阴ァ?br /> 6 試驗方法
6.1 局部封閉涂皮試驗（Buehler Test，BT）
6.1.1 動物數(shù)
試驗組至少20 只，對照組至少10 只。
6.1.2 劑量水平
誘導(dǎo)接觸受試物濃度為能引起皮膚輕度刺激反應(yīng)的{zg}濃度，激發(fā)接觸受試物濃度為不
能引起皮膚刺激反應(yīng)的{zg}濃度。試驗濃度水平可以通過少量動物（2~3 只）的預(yù)試驗獲得。
水溶性受試物可用水或用無刺激性表面活性劑作為賦形劑，其它受試物可用80%乙醇
（誘導(dǎo)接觸）或丙酮（激發(fā)接觸）作賦形劑。
6.1.3 試驗步驟
6.1.3.1 試驗前約24h，將豚鼠背部左側(cè)去毛，去毛范圍為4cm2~6cm2。
6.1.3.2 誘導(dǎo)接觸：將受試物約0.2mL（g）涂在實驗動物去毛區(qū)皮膚上，以二層紗布和一
層玻璃紙覆蓋，再以無刺激膠布封閉固定6h。第7d 和第14d 以同樣方法重復(fù)一次。
6.1.3.3 激發(fā)接觸：末次誘導(dǎo)后14d~28d，將約0.2mL 的受試物涂于豚鼠背部右側(cè)2cm×2cm
去毛區(qū)（接觸前24h 脫毛），然后用二層紗布和一層玻璃紙覆蓋，再以無刺激膠布固定6h。
6.1.3.4 激發(fā)接觸后24h 和48h 觀察皮膚反應(yīng)，按表1 評分。
6.1.3.5 試驗中需設(shè)陰性對照組，使用6.1.3.2 和6.1.3.3 的方法，在誘導(dǎo)接觸時僅涂以溶劑
作為對照，在激發(fā)接觸時涂以受試物。對照組動物必須和受試物組動物為同一批。在