1 范圍
本規(guī)范規(guī)定了動物急性皮膚毒性試驗的基本原則、要求和方法。
本規(guī)范適用于化妝品原料安全性毒理學檢測。
2 規(guī)范性引用文件
OECD Guidelines for Testing of Chemicals（No.402，F(xiàn)eb. 1987）
USEPA OPPTS Harmonized Test Guidelines（Series 870.1200，Aug. 1998）
3 試驗?zāi)康?br /> 急性皮膚毒性試驗可確定受試物能否經(jīng)皮膚吸收和短期作用所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)，可為化
妝品原料毒性分級和標簽標識以及確定亞慢性毒性試驗和其它毒理學試驗劑量提供依據(jù)。
4 定義
4.1 急性皮膚毒性（Acute dermal toxicity）：經(jīng)皮一次涂敷受試物后，動物在短期內(nèi)出現(xiàn)的
健康損害效應(yīng)。
4.2 經(jīng)皮LD50（半數(shù)致死量, Medium lethal dose）：經(jīng)皮一次涂敷受試物后，引起實驗動物
總體中半數(shù)死亡的毒物的統(tǒng)計學劑量。以單位體重涂敷受試物的重量（mg/kg 或g/kg）來表
示。
5 試驗的基本原則
受試物以不同劑量經(jīng)皮給予各組實驗動物，每組用一個劑量。染毒后觀察動物的毒性反
應(yīng)和死亡情況。試驗期間死亡的動物要進行尸檢，試驗結(jié)束時仍存活的動物要處死并進行尸
檢。若已知受試物具有腐蝕性或強刺激性可不進行急性經(jīng)皮毒性試驗。
6 試驗方法
6.1 受試物
液體受試物一般不需稀釋。若受試物為固體，應(yīng)研磨成細粉狀，并用適量水或md、無
刺激性、不影響受試物穿透皮膚、不與受試物反應(yīng)的介質(zhì)混勻，以保證受試物與皮膚有良好
的接觸。常用的介質(zhì)有橄欖油、羊毛脂、凡士林等。
6.2 實驗動物和飼養(yǎng)環(huán)境
可選用健康成年大鼠、家兔或豚鼠作為實驗動物，也可使用其它種屬動物進行試驗。使
用雌性動物應(yīng)是未孕和未曾產(chǎn)仔的。建議實驗動物體重范圍為：大鼠200g~300g；家兔2kg～
3kg；豚鼠350g～450g。實驗動物皮膚應(yīng)健康無破損。試驗前動物要在實驗動物房環(huán)境中至
少適應(yīng)3d～5d 時間。
實驗動物及實驗動物房應(yīng)符合國家相應(yīng)規(guī)定。選用常規(guī)飼料，飲水不限制。
6.3 劑量水平
根據(jù)所選用的方法要求，原則上應(yīng)設(shè)4~6 個劑量組，每組動物一般為10 只，雌雄各半。
各劑量組間距大小以兼顧產(chǎn)生毒性大小和死亡為宜，通常以較大組距和較少量動物進行預(yù)
試。如果受試物毒性很低，可采用一次限量法，即用10 只動物（雌雄各半）皮膚涂抹2000mg/kg
100
體重劑量，當未引起動物死亡，可考慮不再進行多個劑量的急性經(jīng)皮毒性試驗。
6.4 試驗步驟
6.4.1 試驗開始前24h，剪去或剃除動物軀干背部擬染毒區(qū)域的被毛，去毛時應(yīng)非常小心，
不要損傷皮膚以免影響皮膚的通透性。涂皮面積約占動物體表面積的10%，應(yīng)根據(jù)動物體
重確定涂皮面積。體重為200g～300g 的大鼠約為30cm2～40cm2，體重為2kg～3kg 的家兔
約為160cm2～210cm2，體重為350g～450g 的豚鼠約為46cm2～54cm2。
6.4.2 將受試物均勻涂敷于動物背部皮膚染毒區(qū)，然后用一層薄膠片覆蓋，無刺激膠布固定，
防止動物舔食。若受試物毒性較高，可減少涂敷面積，但涂敷仍需盡可能薄而均勻。一般封
閉接觸24h。
6.4.3 染毒結(jié)束后，應(yīng)使用水或其它適宜的溶液qc殘留受試物。
6.4.4 觀察期限一般不超過14d，但要視動物中毒反應(yīng)的嚴重程度、癥狀出現(xiàn)快慢和恢復(fù)期
長短而定。若有延遲死亡跡象，可考慮延長觀察時間。
6.4.5 對每只動物都應(yīng)有單獨全面的記錄，染毒第1d 要定時觀察實驗動物的中毒表現(xiàn)和死
亡情況，其后至少每天進行一次仔細的檢查。包括被毛和皮膚、眼睛和粘膜以及呼吸、循環(huán)、
自主神經(jīng)和zssj系統(tǒng)、肢體運動和行為活動等的改變。特別注意觀察動物是否出現(xiàn)震顫、
抽搐、流涎、腹瀉、嗜睡、和昏迷等癥狀。死亡時間的記錄應(yīng)盡可能準確。
觀察期內(nèi)存活動物每周稱重、觀察期結(jié)束存活動物應(yīng)稱重，處死后進行尸檢。
6.4.6 對實驗動物進行大體解剖學檢查，并記錄全部大體病理改變。對死亡和存活24h 和
24h 以上動物并存在大體病理改變的器官應(yīng)進行病理組織學檢查。
6.4.7 可采用多種方法測定LD50，建議采用霍恩氏法、上-下法、概率單位-對數(shù)圖解法和寇氏法等。
6.5 試驗結(jié)果評價
評價試驗結(jié)果時，應(yīng)將經(jīng)皮LD50 與觀察到的毒性效應(yīng)和尸檢所見相結(jié)合考慮，LD50 值
是受試物毒性分級和標簽標識以及判定受試物經(jīng)皮膚吸收后引起動物死亡可能性大小的依
據(jù)。引用LD50 值時一定要注明所用實驗動物的種屬、性別、染毒途徑、觀察期限等。評價
應(yīng)包括動物接觸受試物與動物異常表現(xiàn)（包括行為和臨床改變、大體損傷、體重變化、致死
效應(yīng)及其它毒性作用）的發(fā)生率和嚴重程度之間的關(guān)系。
毒性分級見表1。
表1 皮膚毒性分級
LD50（mg/kg） 毒性分級
＜ 5 劇毒
5～44 高毒
44～350 中等毒
350～2180 低毒
＞ 2180 微毒