多肽標記和修飾
目前多肽標記及修飾的內容非常多，廣泛應用在多肽yw，多肽生物學，多肽抗體以及多肽試劑的研究中。目前應用廣泛的有：非放射性核素標記（C13，H2），熒光標記（FAM，FITC），生物素標記，磷酸化修飾等。
1. 非放射性核素標記
目前在非放射性核素標記中，使用廣泛的仍然是C13，H2，因為其使用安全，放射性小。現在有比較wq的非放射性標記的氨基酸，可以按照正常的多肽合成方法將標記好的氨基酸直接連接到多肽上。
2. 熒光標記
熒光標記由于沒有放射性，實驗操作簡單。因此，目前在生物學研究中熒光標記應用非常廣泛，熒光標記方法與熒光試劑的結構有關系，對于有游離羧基的采用的方法與接肽反應相同，也采用HBTU/HOBt/DIEA方法連接。但是對于FITC標記，需要在連接FITC前，增加一個氨基己酸，避免在切割的過程中被TFA切割掉。
3. 生物素標記
生物素-親合素系統(tǒng) (biotin-avidin system，BAS)，是70年代后期應用于免疫學，并得到迅速發(fā)展的一種新型生物反應放大系統(tǒng)。由于它具有生物素與親合素之間高度親和力及多級放大效應，并與熒光素、酶、同位素等免疫標記技術有機地結合，使各種示蹤免疫分析的特異性和靈敏度進一步提高。主要有用于標記多肽氨基的生物素N-羥基丁二酰亞胺酯(BNHS)和生物素對硝基酚酯(pBNP)，其中以BNHS最常用，當然，也可以直接使用生物素也可以標記，因為其結構上有個游離的羧基，采用HBTU/HOBt/DIEA方法縮合，由于生物素的溶解度低，使用DMSO/DMF的混合溶劑增加溶解度。
4. 磷酸肽合成
磷酸肽在生命過程中發(fā)揮重要作用，磷酸化的位置在多肽上的Ser，Thr，Tyr。目前磷酸肽合成一般都采用磷酸化氨基酸，目前使用的都是單芐基磷酸化氨基酸，Tyr也可以直接使用磷酸化氨基酸。磷酸化氨基酸的連接一般采用HBTU/HOBt/DIEA方法，但是目前采用該方法合成磷酸化也有缺點，特別是在合成多磷酸化多肽或長肽的時候，連接效率低，{zh1}產品純度很低，對于這種磷酸化多肽，我們考慮采用后磷酸化方法，其合成過程就是在多肽合成結束后，選擇性脫去要標記的氨基酸的側鏈保護基，對于Tyr，Thr可以直接使用側鏈不保護的氨基酸進行反應，而Ser可以采用Fmoc-Ser（trt），在1% TFA/DCM條件下可以定量的脫除。后磷酸化，采用雙芐基亞磷酰胺，四氮唑生成亞磷酰胺四唑活性中間體，連接到羥基上，隨后在過氧酸下氧化生成磷?；?，完成反應。
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4）蛋白偶聯（KLH,BSA,OVA）
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6）不同純度多肽（脫鹽、>70%、75% >80%、85% >90%、>95%、>98%、>99%）
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