鼠血管內(nèi)皮生長因elisa技術(shù)說明書
elisa指標(biāo)：人血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)ELISA試劑盒
elisa kit：Human Vascular Endothelial cell Growth Factor (VEGF)ELISA Kit.
elisa規(guī)格：96T/48T【可拆缷酶標(biāo)板】
elisa質(zhì)量：elisa試劑盒{bfb}廠家供貨，保證產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性，可靠性，歡迎來電訂購！
【人血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)ELISA試劑盒】操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10 孔，在{dy}、第二孔中分別加標(biāo)
準(zhǔn)品100μl，然后在{dy}、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從{dy}孔、第二
孔中各取100μl 分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，
混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉，再各取50μl 分別加到第五、第六孔
中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各
取50μl 分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混
勻后從第七、第八孔中分別取50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)
品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl 棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，
濃度分別為900pg/ml，600pg/ml ，300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml）。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測樣
品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣
品最終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混
勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液：將30（48T 的20 倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T 的20 倍）倍稀釋后備用。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此
重復(fù)5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應(yīng)在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)進行。
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人血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)elisa試劑盒實驗原理：
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)水平。用純化的人血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)，再與HRP 標(biāo)記的血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)濃度。
人血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)elisa試劑盒目的：本試劑盒用于測定人血清，骨髓及相關(guān)液體樣本中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的含量。

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